Γεννημένος στην Άρτα ο Γιάννης Αναστασίου έκανε τα πρώτα ποδοσφαιρικά βήματα στην ομάδα της Πρέβεζας με την οποία αγωνίστηκε στο πρωτάθλημα Γ΄ Εθνικής.Ακολούθησαν πέντε χρόνια στον Εθνικό,δυο χρόνια στον ΟΦΗ και το 1998 είναι η αφετηρία μιας διεθνής καριέρας.Ήταν παίκτης της Άντερλεχτ,της Ρόντα, στον Άγιαξ έμεινε δυο χρόνια και ένα χρόνο στη Σπάρτα Ρότερνταμ.Πέρασε και από την ολλανδική ομάδα Ομνιγουόρλντ Άλμερε της δεύτερης κατηγορίας της Ολλανδίας Eerste Divisie. Κατέκτησε πρωταθλήματα Βελγίου,Ολλανδίας καθώς και το Κύπελλο Ολλανδίας.Έπαιζε ως επιθετικός.
Ήταν αγαπητός σε όποια ομάδα και αν αγωνίστηκε αλλά στον Άγιαξ άφησε το στίγμα του και αγαπήθηκε ως ποδοσφαιριστής. Ως αποκορύφωμα και δείγμα της εκτίμησης του Άγιαξ προς το πρόσωπο του ο Αναστασίου αναλαμβάνει πρώτος προπονητής την ομάδα των ακαδημιών του διάσημου αυτού συλλόγου
